جداسازي، شناسايي و بررسي ميزان تجزيه زيستي باكتري هاي تجزيه كننده آلفانفتول از خاك هاي آلوده به نفت مسجد سليمان

Isolation and identification α-Naphthol-degrading bacteria from oil-contaminated soils of Masjed-e-Soleyman

مقدمه: آلفانفتول، هيدروكربن آروماتيك دوحلقه اي، جهش زاي بالقوه و تركيبي سمي براي موجودات است. حذف كامل آلاينده‌ها و توليدنشدن آلاينده‌هاي ثانويه، سهولت در اجرا و بي‌نيازي از ابزارها و مواد شيميايي گران‌قيمت از دلايل اهميت روش‌هاي اصلاح زيستي نسبت به فناوري‌هاي فيزيكوشيميايي براي پاكسازي منطقه آلوده هستند. مواد و روش ها: ابتدا محيط پايه نمكي (BSM) تهيه و آلفانفتول، منبع كربن براي رشد باكتري‌ها، با غلظت ppm100 به آن اضافه شد. سپس، نمونه هاي خاك جمع آوري‌شده از منطقه آلوده به نفت كه منبع باكتري بودند به محيط اضافه و محيط‌ها 6 هفته در انكوباتور گرماگذاري شدند. باكتري ها با محيط پايه نمكي آگاردار دولايه با غلظت ppm200 آلفانفتول جداسازي شدند و در مرحله بعد، كارايي جدايه ها در حذف آلفانفتول و ديگر هيدروكربن هاي آروماتيك با HPLC بررسي و جدايه برتر شناسايي شد. نتايج: دو جدايه N1 و N2 با توانايي مصرف آلفانفتول جداسازي و خالص شدند. با آزمون هاي بيوشيميايي و بر اساس توالي ژن 16S rRNA، جدايه N1 نسبت به جدايه N2 با حذف 80/5 درصد آلفانفتول و كارايي بيشتر در حذف ديگر هيدروكربنهاي آروماتيك، جدايه برتر شناسايي شد و به گونه سودوموناس پوتيدا UW4 تعلق داشت. بحث و نتيجه گيري: جدايه N1 در دماي 30 درجه سانتيگراد، اسيديته 7 و طي 15روز گرماگذاري، 5/80 درصد آلفانفتول با غلظت ppm100 را حذف كرد كه مقدار درخور توجهي است. با توجه به نتايج، جدايه N1 درشرايط يادشده بخش گسترده‌اي از آلفانفتول را از محيط BSMحذف مي‌كند و در شرايط مشابه، ممكن است بخش چشمگيري از آلفانفتول را از منطقه آلوده حذف كند.

Introduction: α-Naphthol is a two-ring aromatic hydrocarbon that is a toxic compound for all organisms in different ecosystems. Bioremediation technology for remediating PAH-contaminated sites has been proposed to be an efficient, economical and versatile alternative compared with physicochemical methods. Materials and Methods: In this study, the basal salt medium was prepared and then α-Naphthol was added with the concentration of 100ppm. α-Naphthol was a sole source of carbon for the growth of bacteria. Eventually, the medium was inoculated with the soil samples collected from polluted region and incubated for six weeks. Bacteria were isolated using double-layer BSM-agar containing the α-naphthol concentration of 200ppm. The degradation rate of α-naphthol and the other PAHs were determined using HPLC and the effective isolate was finally identified using biochemical and molecular methods. Results: In this study, two isolates (N1 and N2) were isolated that were able to utilize α-Naphthol as a sole source of carbon. The isolate N1 could degrade α-naph thol by 80.5%. Moreover, it was effectively able to degrade the other PAHs than the isolate N2, therefore, it was selected as an efficient isolate. The isolate N1 was identified as Psuedomonas putida UW4 with respect to its 16S rDNA sequence and using biochemical tests. Discussion and conclusion: The isolate N1 could degrade α-naph thol by 80.5% from BSM medium at 30° C, pH 7.0 and the α-naph thol concentration of 100ppm in fifteen days of incub a tion. According to the results, the isolate N1 can remove a large amount of the α-naph thol from BSM medium under the mentioned conditions and it is possible that under a similar situation the isolate N1 can remove a large amount of α-naph thol.