بررسي نقش miR-429 با ميزان بيان ژن E2F3در رده سرطان پستان

The Role of MicroRNA-429 in E2F3 Expression in Breast Cancer Cell Lines

سابقه و هدف: يكي از عوامل كنترل كننده بسياري از اجزاي سلولي و عملكرد هاي بيولوژيك در سطح اپي ژنتيك، MicroRNA ها مي ‌باشند. miR-429 جزو خانواده miR-200 بوده و در متاستاز سرطان دخالت دارد. مطالعات بسياري ارتباط miR-429 را با سرطان كبد، مثانه، روده و معده بررسي كرده‌‌اند. اين مطالعه با هدف تغيير بيان ژن E2F3 پس از ترانسفكت كردن سلول‌هاي MCF-7 با وكتورهاي pre-miR-429 و anti-miR-429 به عنوان هدف احتمالي miR-429، انجام پذيرفت. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، با استفاده از پايگاه هاي داده‌ miR و ابزار هاي بيوانفورماتيكي E2F3 به عنوان هدف miR-429 پيش‌بيني شد. سپس سلول‌هاي MCF-7 با دو وكتور pre-miR-429 و anti-miR-429 ترانسفكت شدند. پس از گذشت 48 ساعت، استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. ميزان بيان miR-429 و ژن هدف با استفاده از روش Real-Time PCR بررسي شد. يافته‌ها: نتايج حاصل از مقايسه گروه سلول‌هاي ترانسفكت نشده، ترانسفكت ‌شده با pre-miR-429 و ترانسفكت شده با anti-miR- 429 نشان دهنده افزايش بيان ژن هدف در اثر ترانسفكشن با anti-miR-429 (38/9 برابر) و كاهش بيان در اثر ترانسفكشن با pre-miR-429 مي‌باشد (3/5 برابر). استنتاج: كاهش بيان miR-429 در متاستاز به استخوان در سرطان پستان نقش داشته و در تومور تخمدان و كارسينوماي كولوركتال كاهش بيان آن باعث كاهش متاستاز و تهاجم مي گردد. در مطالعه حاضر نشان داده شد كه ميزان بيان E2F3 در اثر ترنسفكت با pre-miR-429 كاهش و با anti-miR-429 افزايش مي‌يابد، بنابراين miR-429 مي‌تواند به عنوان ساپرس‌كننده تومور در سرطان پستان از طريق مهار E2F3 عمل كند.

Background and purpose: MicroRNA regulation of cancer-related pathways has a major effect on cancer development. MiR-429 is a member of miR-200 family with an important role in metastasis. There are many studies on the association between miR-429 and liver, bladder, bowel, and gastric cancers. In this study, we investigated the expression changes of E2F3 genes after transfection of MCF-7 cells using pre-miR-429 and anti-miR-429 as the potential targets of miR-429. Materials and methods: In this experimental study, E2F3 was predicted as the potential target of miR-429 using using miRNA bioinformatics tools. MCF-7 cells were then transfected with both mir-429 precursor and inhibitory vectors. RNA extraction and cDNA synthesis were done after 48 hr. Expression of miR-429 and target gene were determined by qRT-PCR. Results: The comparison between the results of untransfected cells group, transfected with pre-miR-429 group, and transfected with anti-miR-429 group showed that down-regulation of miR-429, increased the expression level of E2F3 in cells transfected with miR-429 inhibitory vector (9.38 folds). Expression level of E2F3 decreased in cells transfected with pre-miR-429 vector (5.3 folds). Conclusion: Low expression level of miR-429 in breast cancer was found to be effective in bone metastasis, although in ovarian cancer and colorectal carcinoma, resulted in decreasing invasion and matastasis. In current study, the expression level of E2F3 decreased when transfected with pre-miR-429 vector and increased when transfected with anti-miR-429 vector, therefore, miR-429 could be a potential target in breast cancer therapy.