مروري بر انواع روش‌هاي Real-time PCR و بهينه‌سازي آن

A review on different types of Real-time PCR methods and its optimization

روش Real-time PCR در سال‌هاي اخير به ­عنوان روشي انتخابي جهت تشخيص بسياري از بيماري‌هاي عفوني در آزمايشگاه­ ها مورد استفاده قرار گرفته است. با استفاده از اين فن آوري، واكنش زنجيره پليمراز توسط مولكول‌هاي گزارش ­گر فلورسنت انجام و از اين طريق، توليد فرآورده‌هاي تكثيري طي هر چرخه واكنش PCR گزارش مي‌شود. بدين ترتيب مجموعه‌اي از خصوصيات از جمله؛ حساسيت و اختصاصيت بالا، داده‌هاي قابل اعتماد و خطر پايين آلودگي، فن­ آوري Real-time PCR را به جايگزيني مناسب براي PCR معمولي تبديل كرده است. اين روش اغلب در تعيين كميت سطوح بيان ژن نيز مورد استفاده قرار مي‌گيرد. از آنجايي كه تمامي مراحل Real-time PCR در داخل يك لوله دربسته انجام مي‌شود، خطر ايجاد آلودگي در آن در مقايسه با PCR معمولي بسيار كاهش يافته و در نتيجه از حصول نتايج مثبت كاذب جلوگيري مي‌شود. هدف از اين مقاله، مرور كلي در مورد انواع مختلف روش Real-time PCR، مزايا و كاربردهاي آن مي‌باشد.

In the recent years, Real-time PCR technique introduced as a choice method for diagnosis of infectious diseases in many laboratories. During each cycle of the PCR reaction, this technique combines the polymerase chain reaction chemistry with the utilization of fluorescent reporter molecules for monitoring the production of amplification products. Therefore, the set of features including the high sensitivity and specificity, repeatable data and low contamination risk has made the Real-time PCR technology as an attractive alternative to conventional PCR. This technique is often used to quantify the level of gene expression. Since the whole Real-time PCR reaction is performed within a closed tube, the risk of contamination is reduced and eventually prevent false-positive results. The aim of present study was to provide a general overview on different types of Real-time PCR methods, their benefits and applications.