تشخيص عفونت هاي H.pylori بر اساس روش HM-CAP ELISA و مقايسه آن با كيت تجارتي

Diagnosis of H.pylori infection by HM-CAP ELISA and comparing to a commercial ELISA Kit

تحقيقات اخير نشان داده اند كه Helicobacter pylori از عوامل اختلالات معدي-روده اي بوده و با كارسينوماي معده و لنفوم (Mucosal-associated lymphatic tissue=MALT) در ارتباط است. ابداع يك روش غير تهاجمي معتبر براساس (Enzyme-linked immuno-sorbent assay=ELISA)، تشخيص عفونت هاي اين باكتري و انجام مطالعات غربالگري گسترده در بين جمعيت هاي مختلف جامعه را امكان پذير مي سازد. در اين تحقيق از باكتري هاي H.pylori، جدا شده از نمونه هاي بيوپسي معده، پروتئين هاي متصل به غشاء باكتري توسط دترجنت (N-octyl-β-D-glycopyranoside=NOG) استخراج شد و سپس از اين مجموعه پروتئين هاي با وزن مولكولي زياد (High molecular-cell associated proteins=HM-CAP)، منجمله آنزيم اوره آز به طريق كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون تخليص گرديد تا از آن به عنوان آنتي ژني براي پوشش دادن پليت هاي ميكروتيتر ELISA استفاده شود. سرم 24 بيمار از نظر وجود آنتي بادي عليه H.pylori به دو روش براساس ELISA ، يك روش حاصل از اين تحقيق و ديگري كيت تجاري RADIM، مورد بررسي قرار گرفتند. مقايسه نتايج كيفي سرم بيماران تست شده با اين روش ها نشان مي دهند كه در 15 مورد هردو روش جواب مثبت و در 5 مورد هردو روش جواب منفي داشته و در بقيه موارد جواب يكي از روش ها مشكوك بوده است. به بيان ديگر نتايج كيفي سرم هاي تست شده به روش HM-CAP ELISA مثبت به كيت تجارتي از نظر حساسيت و ويژگي مطابقت دارد. همچنين مقايسه نتايج كمي اين دو روش، ضريب همبستگي (R=0.89) را بين آنها نشان مي دهد كه اين ضريب همبستگي از نظر آماري معني دار است (P<0.001). بنابراين مي توان ادعا كرد كه روش ابداعي اين تحقيق براي تشخيص عفونت هاي H.pylori داراي اعتبار مي باشد.

It has been shown that, Helicobacter Pylori is strongly associated with peptic ulcers, and recently a link between H.pylori and gastric cancer and MALT lymphoma has been found. Among several diagnostic methods for H.pylori infection, the easiest way, in patients who have not undergone endoscopy, is testing the antibodies to the infection. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the most commonly used serological test because it is simple, quick and low-cost, making it suitable for screening a large population. In order to modify the specificity of ELISA test, we extracted the cell-associated proteins of H.pylori cells by NOG (N-Oclyl-β-D-Glycopyranosde) detergent. Then its high molecular proteins were purified by gel filtration employing sephacryl S 300 HR. These proteins were used as antigen to standardize the ELISA test. The results obtained from sera tested by this method, as compared to a commercial ELISA test, showed complete accuracy, specificity and sensitivity. Regression rate of antibody titers between the two methods was 0.89, which was statistically significant (P<0.001).