كاربرد روش استخراج فاز جامد انتخابي با استفاده از پليمرهاي قالب مولكولي و كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا براي اندازه گيري مقدارهاي جزئي سلكوكسيب در نمونه هاي ادرار

Application of Molecularly Imprinted Solid-Phase Extraction Coupled with HPLC for Preconcentration and Trace Determination of Celecoxib in the Human Urine Samples: Optimization by Central Composite Design (CCD)

در اين پژوهش از يك پليمر قالب مولكولي (MIP) براي اندازه گيري مقدارهاي ناچيز سلكوكسيب در نمونه هاي ادرار به روش استخراج فاز جامد انتخابي (SPE) و كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا (HPLC)، استفاده شد. براي سنتز پليمر قالب مولكولي به روش غيركووالانسي از سلكوكسيب به عنوان مولكول هدف، متاكريليك اسيد (MAA) به عنوان مونومر عاملي، اتيلن گليكول دي متاكريلات (EGDMA) به عنوان اتصال دهنده عرضي، آزوبيس ايزوبوتيرونيتريل (AIBN) به عنوان آغازگر و كلروفرم به عنوان حلال استفاده شد. همچنين پليمر مولكول نگاري نشده (NIP)، كه تنها تفاوت آن با پليمر قالب مولكولي در نبود مولكول هدف مي باشد، براي مقايسه سنتز شد. ويژگي هاي پليمرهاي سنتز شده به وسيله طيف هاي فروسرخ (FT-IR) و تصويرهاي ميكروسكوپ الكتروني روبشي (SEM) مورد بررسي قرار گرفتند. شرايط بهينه سازي براي پارامترهاي تاثيرگذار در استخراج دارو مانند pH، سرعت جريان محلول هاي عبوري و شستشو، حجم حلال شوينده و مقدار گرم جاذب، براي دستيابي به درصد بازيابي هاي بالا، با استفاده از روش طراحي آزمايش و كمومتريكس مورد مطالعه قرار گرفت. ظرفيت فاز جامد براي پليمر قالب مولكولي سنتز شده نيز با استفاده از هم دماي لانگموير 15.06 ميلي گرم بر گرم به دست آمد. حد تشخيص (LOD) و حد آشكارسازي (LOQ) روش تجزيه اي به ترتيب 8 و 26.7 نانوگرم بر ميلي ليتر و همچنين ميزاندرصد بازيابي براي نمونه هاي ادرار در بازه 102-92.60 درصد و انحراف استاندارد نسبي (RSD%)كمتر از 4.65 % به دست آمد. نتيجه هاي به دست آمده نشان دادند، اين روش از ظرفيت شناسايي، بازده و تكرارپذيري بالا براي جداسازي و اندازه گيري مقدارهاي ناچيز سلكوكسيب در نمونه هاي ادرار برخوردار است.

A Molecularly Imprinted Solid-Phase Extraction (MISPE) coupled with High- Performance Liquid Chromatography with UV detection (HPLC/UV) described for preconcentration and trace determination of celecoxib in human urine samples. The synthesis of the Molecularly Imprinted Polymer (MIP) was performed by a non-covalent approach using methacrylic acid (MAA) as the functional monomer, ethylene glycol dimethacrylate (EGDMA) as the cross-linker monomer, chloroform as the solvent, 2,2′-azobisisobutyronitrile (AIBN) as the initiator and celecoxib template as the target drug. Non-molecularly Imprinted Polymer (NIP) was also synthesized for comparison. Scanning Electron Microscopy (SEM) and FT-IR spectroscopy were used for characterizing the synthesized polymers. Also, a Central Composite Design (CCD) under Response Surface Methodology (RSMand chemometrics applied to investigate and optimize the MISPE procedure parameters such as pH, loading and eluent solvent flow-rate, eluent solvent volume and sorbent mass, that probably influence the extraction process, to achieve the highest celecoxib extraction efficiency. Batch rebinding capacity of celecoxib was determined from the derived Langmuir isotherm and was found to be 15.06 mg/g. The Limit of Detection (LOD) and Limit of Quantification (LOQ) of this proposed method were 8 ng/mL and 26.7 ng/mL, respectively. The recoveries were 92.60-102% and the Relative Standard Deviation (RSD %) was lower than 4.65% in spiked urine samples. Accordingly, the proposed MISPE-HPLC/UV method can be used for the separation of trace amounts of celecoxib in human urine samples