ارزيابي ايمني زايي پپتيد EgP-29aa134-142 مشتق از «اكينوكوكوس گرانولوزوس» در موش هاي نژاد BALB/c

Immunogenicity Evaluation of A Synthetic Peptide EgP-29aa134-142 from Echinococcus granulosus In BALB /c Strain Mice

زمينه و هدف: هيداتيدوزيس يا بيماري كيست هيداتيد از جمله مهمترين بيماري­هاي انگلي مشترك بين انسان ودام است كه در اثر آلودگي با لارو انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس ايجاد مي­ شود. پروتئين p29با وزن مولكولي 29 كيلودالتون از آنتي­ژن هاي اختصاصي پروتواسكولكس اين انگل بوده كه به علت داشتن واكنش متقاطع با آنتي­ژن اصلي تشخيصي اين انگل به نام Ag5 كانديد استفاده درتشخيص بيماري و تهيه واكسن مي ­باشد. در اين مطالعه نواحي اپيتوپي اين پپتيد پس از شناسايي و سنتز به منظور بررسي اثر تحريكي و سنجش پاسخ ايمني در مدل موشي به كار گرفته شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه ابتدا نواحي اپيتوپي آنتي­ژن p29 انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس توسط نرم ­افزار بيوانفورماتيكي IEDB شناسايي شده و درغالب توالي 8 آمينواسيدي سنتز گرديد و به منظور ايمني­زايي به موش­ هاي نژادBALB /C سه مرتبه با فاصله دو هفته از هم بطور زير جلدي تزريق شد. دو هفته بعد از آخرين تزريق سلول­هاي طحال موشها در حضور آنتي ژن پپتيدي به مدت 72 ساعت كشت داده شد و ميزان سايتوكاين­هاي IFN-g،IL-4 وIL-10 با استفاده از روش الايزا در مايع رويي كشت سلول­هاي طحال موش­هاي ايمن شده در مقايسه با گروه كنترل، مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: آناليز نتايج حاصل از موش ­هاي ايمن شده با پپتيد سنتتيك طراحي شده p29 نشان داد كه اين پپتيد موجب افزايش IFN-g در موش­هاي ايمن شده نسبت به گروه­هاي كنترل و ادجوانت گرديد.اين درحالي است كه هيچ گونه تغيير معناداري در دو سايتوكاين IL-4و IL-10در اين موش ها مشاهده نشد . نتيجه­ گيري: اين مطالعه به ارزيابي اثر پپتيد سنتتيك EgP-29aa134-142 بر روي پاسخ ايمني پرداخته است و نتايج ما نشان مي دهد اين پپتيد مي تواند موجب افزايش IFN-g و در نتيجه القاي ايمني ذاتي و همچنين پاسخ CTL وTH1 شود

Background: Cystic echinococcosis or hydatid disease is a widely endemic helminthic zoonotic disease caused by infection with metacestodes the larval stage of the tapeworm Echinococcus granulosus. P-29، a 29-kDa antigen from E. granulosus، is a protoscolex specific component. The immunologic cross reactivity between P-29 and a major diagnostic antigen of E. granulosus (Ag5) indicated that P-29 might be another useful antigen of E. granulosus to be used in diagnosis or in multi epitope vaccines to prevent secondary echinococcosis. In this study، the peptide epitope regions after the identification and synthesis were evaluated in order to determine the effect of stimulating an immune response in a mouse model. Methods: In this study، the p29 antigen epitope regions of the parasite Echinococcus granulosus detected by the IEDB Bioinformatics software and a 8 amino acids sequence were synthesized. BALB/c mice were immunized subcutaneously three times with two weeks interval. Fourteen days after last immunization spleen tissues were extracted and splenocytes were cultured in presence of antigen for 72 hours. Supernatants were collected and used for cytokine assay by Quantikine ELISA kit. Results: Sandwich ELISA results were analyzed and showed significant difference in IFN-γ but no significant differences observed in levels of two cytokines IL-4، IL-10، between immunized and control groups. Conclusion: This study has assessed the effect of synthetic peptide EgP-29aa134-142 on the immune response and our results showed that the peptide can increase IFN-γ and therefore induce activation of innate Immunity as well as CTL and Th1 response.